hPSC-多巴胺能神经元分化试剂盒-体细胞定向分化试剂盒-细胞试剂-中盛溯源
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hPSC-多巴胺能神经元分化试剂盒


Nuwacell™ hPSC-多巴胺能神经元分化试剂盒是中盛溯源生物科技有限公司原研的一种适用于人类多能干细胞(hPSC)分化为成熟多巴胺能神经元(mDAN: midbrain Dopaminergic neuron)的产品。该试剂盒包含前体细胞分化试剂盒、前体细胞维持培养基和神经元成熟分化培养基,可根据具体需求灵活选择。应用Nuwacell™ 人类多巴胺能神经前体细胞分化试剂盒可以由hPSC获得高纯度的mDAP (>90% Lmx1a+/ Foxa2+/ En1+);多巴胺能神经元成熟培养基可以将mDAP分化为成熟的mDAN(TH+/Nurr1+),具有mDAN特异性电生理活性和释放多巴胺的功能。分化获得的人多巴胺能神经前体细胞和人多巴胺能神经元可应用于神经退行性疾病的科学研究,药物筛选,以及帕金森疾病模型的细胞移植。


Nuwacell™ hPSC-多巴胺能神经元分化试剂盒产品详细信息


*每个试剂盒可分化获得超过1×107的多巴胺前体细胞(mDAP,DAY11)。

*将基础培养基和添加物混匀配置成分化培养基,可在2℃~8℃中存储,2周内用完。


1、分化详细流程图


Nuwacell™ hPSC-多巴胺能神经细胞分化试剂盒分化流程图。


2、分化过程中细胞形态图示


Nuwacell™  hPSC-多巴胺能神经元分化试剂盒分化过程中细胞形态图示。

图示为DAY  0启动分化时的hPSC,DAY  11收获的mDAP(多巴胺能神经前体细胞),

DAY 12维持培养的mDAP,DAY 45的mDAN(成熟多巴胺能神经元)。标尺:200μm。


3、hPSC来源多巴胺能前体细胞(mDAP)特异性标志物检测


Nuwacell™ hPSC-多巴胺能神经前体细胞分化试剂盒分化的mDAP细胞荧光图示。

LMX1A,FOXA2,EN1为mDAP的特异性标志物,免疫荧光染色检测。标尺:200μm。


Nuwacell™  hPSC-多巴胺能神经前体细胞分化试剂盒分化的mDAP特异性标志物检测。

图A为RT-qPCR检测;NKX2.1为间脑标记物、DBX1为中脑前端标志物;LMX1a、FOXA2、EN1、OTX2为中脑标志物,GBX2为后脑标志物。图B为流式细胞法检测。


4、hPSC来源成熟多巴胺能神经元(mDAN)特异性标志物和功能检测


hPSC来源的成熟中脑多巴胺能神经元(mDAN,DAY 40)细胞荧光图示。

TH和Nurr1共表达为mDAN的特异性标志物,免疫荧光染色检测。标尺:200μm。


hPSC来源的成熟中脑多巴胺能神经元(mDAN,DAY 45)多巴胺释放水平检测结果,多巴胺释放>2000pg/mL

对照组为hPSC(正常细胞多巴胺释放为0-100pg/mL),放射性免疫法检测。


hPSC来源的成熟中脑多巴胺能神经元(mDAN,DAY 42)膜片钳测试结果。

选取符合形态特征的mDA进行膜片钳测试,可检测到较稳定的2-10Hz的节律性自发放电;

在电压钳模式下,给以超极化电压可见缓慢增大的内向电流(H电流)。标尺:20μm。